2024-08-13 15:16瀏覽量:260
ELISA(酶聯(lián)免疫吸附試驗)根據(jù)其操作原理和檢測目標(biāo)的不同,大致可以分為四種方法類型:直接法、間接法、夾心法和競爭法。以下是每種方法的詳細(xì)介紹:
原理:
將抗原直接固定于固相載體上,隨后加入酶標(biāo)記的一抗(即針對該抗原的特異性抗體,且該抗體已用酶進(jìn)行標(biāo)記),一抗與抗原特異性結(jié)合后,通過酶催化底物顯色來檢測目標(biāo)抗原的存在。
特點:
實驗步驟少,檢測速度快。
不需要用到二抗,避免了交叉反應(yīng)的可能性。
但由于抗原不是特異性固定的,樣本中的靶蛋白及其他雜質(zhì)蛋白都可能會與固相載體結(jié)合,導(dǎo)致實驗背景較高。
靈敏度相對較低,因為缺少二抗的信號放大作用。
原理:
將抗原固定于固相載體上,加入待測樣本中的一抗(即針對該抗原的特異性抗體),一抗與抗原特異性結(jié)合后,再加入酶標(biāo)記的二抗(即能夠識別并結(jié)合一抗的抗體,且該抗體已用酶進(jìn)行標(biāo)記),最后通過酶催化底物顯色來檢測目標(biāo)抗體的存在。
特點:
靈敏度較高,因為使用了酶標(biāo)記的二抗進(jìn)行信號放大。
實驗步驟相對較多,包括一抗和二抗的孵育過程,因此實驗周期較長。
存在交叉反應(yīng)的可能性,因為酶標(biāo)記的二抗可能與樣本中的其他非特異性成分結(jié)合。
原理:
主要用于檢測大分子抗原。將捕獲抗體(即針對目標(biāo)抗原的特異性抗體)固定于固相載體上,加入待測樣本中的抗原,抗原與捕獲抗體特異性結(jié)合后,再加入酶標(biāo)記的檢測抗體(即另一種能夠識別并結(jié)合目標(biāo)抗原的特異性抗體,且該抗體已用酶進(jìn)行標(biāo)記),最后通過酶催化底物顯色來檢測目標(biāo)抗原。
特點:
靈敏度和特異性均較高,因為使用了兩種特異性抗體進(jìn)行夾心檢測。
適用于檢測具有兩個以上識別位點的大分子蛋白。
對配對抗體的要求較高,需要確保兩種抗體能夠與目標(biāo)抗原特異性結(jié)合且互不干擾。
原理:
樣本中的抗原(或抗體)與預(yù)包被在固相載體上的酶標(biāo)記抗原(或抗體)競爭性地與未標(biāo)記的特異性抗體(或抗原)結(jié)合。通過比較酶標(biāo)記抗原(或抗體)與未標(biāo)記抗原(或抗體)的結(jié)合情況,可以評估樣本中目標(biāo)抗原(或抗體)的濃度。
特點:
適用于檢測小分子物質(zhì)或藥物,因為這些物質(zhì)通常只有一個識別位點。
顯色結(jié)果與待檢抗原(或抗體)的量成反比,即樣本中抗原(或抗體)含量越多,顯色越淺。
靈敏度較高,但整體敏感性和專一性可能較差,因為競爭反應(yīng)受到多種因素的影響。
綜上所述,ELISA的四種方法類型各有其特點和適用范圍,在實際應(yīng)用中應(yīng)根據(jù)具體需求選擇合適的方法。
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