2024-07-08 16:12瀏覽量:110
喹乙醇代謝物ELISA檢測試劑盒的原理主要基于競爭ELISA方法,具體步驟如下:
ELISA(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn))是一種常用的免疫學(xué)檢測方法,其基本原理是將抗原或抗體吸附在固相載體表面,然后加入酶標(biāo)二抗,最后通過底物顯色反應(yīng),根據(jù)顏色變化來檢測抗原-抗體反應(yīng)的存在。在喹乙醇代謝物ELISA檢測試劑盒中,這一原理被應(yīng)用于檢測樣本中的喹乙醇代謝物。
包被抗原:在酶標(biāo)板微孔上預(yù)包被喹乙醇代謝物抗原。這是檢測的基礎(chǔ),為后續(xù)的抗原-抗體反應(yīng)提供了固定的反應(yīng)位點(diǎn)。
競爭反應(yīng):檢測時,加入標(biāo)準(zhǔn)品或樣品溶液,喹乙醇代謝物抗體及酶標(biāo)記物。樣本中殘留的喹乙醇代謝物和預(yù)包被的喹乙醇代謝物抗原競爭性地與喹乙醇代謝物抗體結(jié)合。這一步驟是競爭ELISA方法的核心,通過競爭反應(yīng)來定量樣本中的喹乙醇代謝物含量。
酶聯(lián)反應(yīng):加入酶標(biāo)二抗后,酶標(biāo)二抗能夠與已經(jīng)與抗原結(jié)合的抗體結(jié)合,形成酶標(biāo)抗原-抗體復(fù)合物。這一步驟進(jìn)一步放大了抗原-抗體反應(yīng)的信號。
底物顯色反應(yīng):在加入TMB(四甲基聯(lián)苯胺)等底物后,酶標(biāo)抗原-抗體復(fù)合物與底物發(fā)生顯色反應(yīng),產(chǎn)生顏色變化。顯色反應(yīng)的強(qiáng)度與樣本中喹乙醇代謝物的含量成反比,即樣本中喹乙醇代謝物含量越高,顯色反應(yīng)越弱;反之,則越強(qiáng)。
終止反應(yīng)與檢測:顯色反應(yīng)持續(xù)一定時間后,加入反應(yīng)終止液以停止顯色反應(yīng)。終止液一般是酸或堿溶液,可以使酶失活。隨后,在450nm波長酶標(biāo)儀下檢測各孔的光密度值(OD值)。通過標(biāo)準(zhǔn)曲線可以得出樣本中喹乙醇代謝物的濃度。標(biāo)準(zhǔn)曲線是通過檢測已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)品繪制而成的,用于將OD值轉(zhuǎn)換為具體的濃度值。
喹乙醇代謝物ELISA檢測試劑盒利用競爭ELISA方法,通過包被抗原、競爭反應(yīng)、酶聯(lián)反應(yīng)、底物顯色反應(yīng)和終止反應(yīng)等步驟,快速、準(zhǔn)確地檢測樣本中的喹乙醇代謝物含量。該試劑盒具有靈敏度高、操作簡便、結(jié)果可靠等優(yōu)點(diǎn),廣泛應(yīng)用于食品安全檢測等領(lǐng)域。